Nồng độ kháng thể IgG kháng SARS-CoV-2: sau tiêm chủng vắc xin Covid-19

Tiến hành nghiên cứu

Nhóm nghiên cứu bao gồm 477 tình nguyện viên trưởng thành, 362 phụ nữ và 115 nam giới.

Tất cả đều được đánh giá về năng lực ra chỉ định y tế bằng cách sử dụng một đánh giá đã được chuẩn hóa, đã được phê duyệt và tự nguyện đồng ý trước khi đăng ký tham gia vào nghiên cứu. Các bệnh nhân đại diện cho các phân nhóm nghiên cứu được thể hiện: 24 người khỏe mạnh và chưa được tiêm chủng; 15 người được xác nhận nhiễm SARS-CoV-2 nhưng không có triệu chứng (chưa được chủng ngừa); 82 người nhiễm SARS-CoV-2 và có nhiều triệu chứng nhiễm trùng (chưa được chủng ngừa); 19 người đã được chủng ngừa trong vòng 2 hoặc 3 tuần nhưng không có SARS-CoV-2; 203 người đã tiêm liều thứ hai trong vòng 1 đến 5 tuần trước khi lấy mẫu máu để phân tích và không có SARS-CoV-2; 124 bệnh nhân được xác nhận nhiễm SARS-CoV-2 và đã được tiêm chủng vào các thời điểm tương ứng.

Xác định định lượng các kháng thể IgG chống lại SARS-CoV-2

Nguyên liệu ban đầu để phân tích là huyết thanh thu được sau khi ly tâm toàn bộ máu trong ống máu trong 5 phút ở tốc độ 4000 vòng / phút. Sau đó, huyết thanh được lấy ra khỏi viên tế bào một cách cẩn thận và sử dụng. Tùy thuộc vào phân nhóm bệnh nhân, huyết thanh được pha loãng 5-, 10-, 20-, 50 hoặc 100 lần. Xét nghiệm hấp thụ miễn dịch liên kết với enzym (ELISA) được sử dụng để xác định định lượng trong ống nghiệm của các kháng thể IgG đối với SARS-CoV-2. Các xét nghiệm được thực hiện bằng máy phân tích tự động EUROIMMUN Analyzer I-2P và bộ AntiSARS-CoV-2 QuantiVac ELISA (IgG) EUROIMMUN (Lübeck, Đức) theo hướng dẫn của nhà sản xuất. Các giếng phản ứng xét nghiệm được phủ bằng miền S1 của protein đột biến SARS-CoV-2 được biểu hiện tái tổ hợp trong dòng tế bào HEK 293 và cho phép phát hiện cụ thể các kháng thể IgG chống lại SARS-CoV-2 bằng cách sử dụng miền S1 của protein đột biến, bao gồm miền liên kết thụ thể có liên quan về mặt miễn dịch (RBD), đại diện cho kháng nguyên đích quan trọng đối với các kháng thể trung hòa vi rút. Trong bước đầu tiên, các giếng phản ứng được ủ với các mẫu bệnh phẩm đã được pha loãng (độ pha loãng 1: 101) trong 60 phút ở 37 độ C. Khi có các kháng thể IgG liên kết với các kháng nguyên trên bề mặt giếng. Sau khi rửa bằng dung dịch (3 × 450 µL), các kháng thể liên kết được ủ trong 30 phút ở 37 độ C với 100 µL của liên hợp kháng thể IgG-peroxidase. Sau khi rửa tiếp theo (3 × 450 µL), 100 µL dung dịch chất nền / chromogen được thêm vào mỗi giếng và ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng (RT). Trong giai đoạn cuối của quy trình, 100 µL dung dịch dừng được thêm vào mỗi giếng. Phép đo quang xác định cường độ màu được thực hiện ở bước sóng 450 nm. Kết quả được biểu thị bằng đơn vị kháng thể liên kết (BAU) / mL. Một đường cong chuẩn sáu điểm (3,2–384 BAU / mL) được thực hiện song song, và đối chứng dương tính và âm tính ở dạng IgG của người được sử dụng.

Kết quả nghiên cứu kháng thể IgG

Các mẫu huyết thanh được thu thập từ 477 cá thể trong khoảng thời gian từ ngày 2 tháng 2 đến ngày 9 tháng 3 năm 2021 tại Toru´n, Ba Lan. Những người tham gia chính là các chuyên gia y tế, nhân viên và bệnh nhân của các viện dưỡng lão, thanh tra vệ sinh và dịch tễ học, và các tình nguyện viên. Những người tham gia nghiên cứu đã hoàn thành một bảng câu hỏi, trong đó có thông tin về: tuổi, ngày khởi phát COVID-19 và các triệu chứng nhiễm trùng, ngày sử dụng các liều vắc-xin và các bệnh mãn tính cùng tồn tại. Độ tuổi của những người tham gia dao động từ 18 đến 93 tuổi và các mẫu được lấy vào các thời điểm khác nhau sau khi xác nhận nhiễm SARS-CoV-2 hoặc tiêm chủng mRNA: 18,2% người tham gia dưới 35 tuổi, 25,4% là 36–45, 22,2% là 46–55, 23,1% là 56–64 và 11,1% từ 65 tuổi trở lên. Tổng cộng có 362 nữ (75,9%) và 115 nam (24,1%) tham gia. Nhóm nghiên cứu bao gồm những người hồi phục có triệu chứng và không có triệu chứng và những người được tiêm vắc xin mRNA liều đầu tiên và thứ hai. Trong số 477 mẫu huyết thanh, 356 mẫu đến từ những người đã được chủng ngừa trong khoảng thời gian 2 tuần sau liều đầu tiên và 5 tuần sau liều thứ hai, 134 mẫu từ những người đã khỏi bệnh và 121 mẫu được lấy từ những người chưa được tiêm chủng. Những người khỏe mạnh được chọn làm nhóm đối chứng. Cấu trúc chi tiết của nhóm nghiên cứu, được chia thành các danh mục phụ theo độ tuổi và giới tính. Nhóm bao gồm 16 người bị bệnh với COVID-19 trong vòng 2 tuần sau khi dùng liều đầu tiên, 1 người bị bệnh 4 tuần. sau khi uống liều đầu tiên, và 2 người có kết quả dương tính ở 4 và 6 tuần sau khi uống liều thứ hai của vắc xin mRNA. Những người này ngã bệnh vài ngày sau khi xét nghiệm huyết thanh học cho thấy rằng chúng có hiệu giá kháng thể cao lần lượt là 262,2 BAU / mL và 1106 BAU / mL).

So sánh mức kháng thể giữa các phân nhóm

Nồng độ kháng thể IgG kháng SARS-CoV-2 nằm trong khoảng từ 0 đến 38.400 BAU / mL được phân tích trong nghiên cứu. Nồng độ dưới 25,6 BAU / mL (kết quả âm tính) được tìm thấy ở những người không được tiêm chủng và không bị nhiễm SARS-CoV-2, 12 người đã hồi phục (nhiễm trùng được xác nhận vào tháng 10 và tháng 11 năm 2020), cũng như ở 3 người chỉ mới dùng liều vắc xin mRNA đầu tiên. Miễn dịch dịch thể tương đối thấp được tìm thấy ở ba bệnh nhân 2 tuần sau khi dùng liều thứ hai (78 BAU / mL ở một phụ nữ 86 tuổi, 89 BAU / mL ở một phụ nữ 80 tuổi và 106,02 BAU / mL ở một bệnh nhân nam 46 tuổi).

Ở những đối tượng có huyết thanh âm tính, vào tuần thứ ba sau khi chủng ngừa, mức độ trung bình của kháng thể cao hơn so với những đối tượng có huyết thanh dương tính không tiêm chủng, điều này chứng tỏ hiệu quả của vắc-xin trong việc tạo ra phản ứng dịch thể. Từ 10 đến 14 ngày sau liều thứ hai, mức IgG tăng gấp 10 lần.

Mức độ kháng SARS-CoV-2 IgG cao nhất được tìm thấy ở những đối tượng được tiêm chủng đã từng bị nhiễm SARS-CoV-2, cả sau liều đầu tiên và liều thứ hai, bất kể tuần tiêm chủng. Hai tuần sau liều đầu tiên, mức độ trung bình của kháng thể ở các đối tượng âm tính thấp hơn so với các đối tượng huyết thanh dương tính không tiêm chủng. Trong tuần thứ ba sau liều đầu tiên, những bệnh nhân được tiêm phòng đã được tiêm phòng có hiệu giá kháng thể IgG cao hơn 11 lần so với những người chưa được tiêm liều đầu tiên trong cùng khoảng thời gian (348,00 BAU / mL so với 3989,00 BAU / mL; p = 0,008). Sau liều đầu tiên, nồng độ trung bình IgG kháng SARS-CoV-2 huyết thanh dương tính trung bình mỗi tuần cao hơn so với đối tượng âm tính sau liều vắc-xin mRNA thứ hai.

So sánh TestLine U / ml với BAU / ml để đánh giá định lượng kháng thể IgG

Một loạt các xét nghiệm miễn dịch với các kết quả khác nhau để đo phản ứng miễn dịch với SARS-CoV-2 được cung cấp trên toàn cầu.

Do đó, WHO đã cung cấp Tiêu chuẩn Quốc tế đầu tiên của WHO (IS) cho globulin miễn dịch chống SARS-CoV-2 (mã NIBSC: 20/136) cho phép hiệu chuẩn chính xác các xét nghiệm đến một đơn vị tùy ý, do đó giảm sự khác biệt giữa các phòng thí nghiệm và tạo ra một ngôn ngữ chung cho dữ liệu báo cáo.

Tiêu chuẩn là một tập hợp huyết tương dưỡng bệnh từ những bệnh nhân COVID-19 đã phục hồi, có chứa hiệu giá cao của kháng thể (Ab) chống lại SARS-CoV-2 với hiệu lực được chỉ định là 250 IU / ống để trung hòa hoạt tính Ab. Sau khi pha trong 0,25 mL nước cất, nồng độ cuối cùng của chế phẩm là 1000 IU / ml. Đối với các xét nghiệm Ab liên kết, đơn vị tùy ý của 1000 đơn vị kháng thể liên kết (BAU) / ml, có thể được sử dụng để hỗ trợ việc so sánh các xét nghiệm phát hiện cùng một loại globulin miễn dịch có cùng độ đặc hiệu (ví dụ: anti-RBDIgG, anti-NIgM, v.v. .).

Bằng cách chuẩn độ Tiêu chuẩn nêu trên, TestLine (TL) đáp ứng yêu cầu xác định chính xác mức Ab chống lại SARS-CoV-2. TL Calibrator 6 (1000 U / ml) trong bộ EIA RBD IgG được đặt thành 1000 BAU / ml.

Mối tương quan giữa kết quả của bộ dụng cụ ELISA VNT và TestLine

Liên kết Ab (BAbs) được định nghĩa là Ab liên kết xuyên suốt các protein SPIKE (S), trong khi Ab trung hòa (NAbs) chỉ được tạo ra chống lại Miền liên kết thụ thể (RBD).

Theo các tài liệu mới nhất, thích hợp nhất là sử dụng xét nghiệm trung hòa vi rút (VNT) để xác định hoạt tính bảo vệ của NAbs. Tuy nhiên, phương pháp VNT tốn nhiều thời gian (2-4 ngày) và ngoài ra, cần phải làm việc với virus sống (phòng thí nghiệm mức độ bảo vệ BSL3).

Qua nghiên cứu tương quan TL khẳng định mức độ thống nhất cao giữa kết quả thu được của VNT và TL EIA COVID-19 RBD IgG kit. Mức độ NAbs tương ứng với mức độ kháng RBD IgG Ab và do đó, bộ dụng cụ EIA do TL phát triển có thể được sử dụng để xác định xem nồng độ Ab có tác dụng bảo vệ hay không (dữ liệu đầy đủ có sẵn trong một tờ rơi riêng biệt). Bởi vì RBD là protein sinh miễn dịch chính, nó cũng cho thấy (trên bộ kit TL Microblot-Array COVID-19 IgG) rằng Ab với các protein S1 khác xảy ra cùng với RBD Ab trong 99% (xem biểu đồ bên dưới). Do đó, người ta kết luận rằng tỷ lệ giữa mức BAbs và TL U / ml là 1: 1.

So sánh bộ dụng cụ TestLine COVID-19 RBD ELISA với Bảng xác minh Anti-SARS-CoV-Verification Panel

Các xét nghiệm huyết thanh học (mã NIBSC: 20 / B770) nhằm mục đích sử dụng như một xác minh để phát hiện các tuyên bố của nhà sản xuất về việc phát hiện SARS- CoV-2 Ab và bao gồm 37 mẫu (23 dương tính và 14 âm tính).

Thử nghiệm cho thấy bộ dụng cụ TL EIA RBD (không chỉ trong IgG) có thể so sánh được với các thử nghiệm hiện có khác. Sự đồng ý ở tất cả các lớp Ig là từ 91 đến 100%